A sejttenyészetek szennyeződése könnyen a sejttenyésztő laboratóriumok leggyakoribb problémájává válhat, ami esetenként nagyon súlyos következményekkel jár.A sejttenyészet szennyezőanyagai két kategóriába sorolhatók: kémiai szennyeződések, például táptalaj, szérum- és vízszennyeződések, endotoxinok, lágyítók és detergensek, valamint biológiai szennyezők, például baktériumok, penészgombák, élesztőgombák, vírusok, mikoplazmák keresztfertőzése.Más sejtvonalakkal szennyezett.Bár a szennyeződést lehetetlen teljesen megszüntetni, annak gyakorisága és súlyossága csökkenthető, ha alaposan megértjük a szennyeződést, és betartjuk a jó aszeptikus technikákat.
1. Ez a szakasz felvázolja a biológiai szennyeződés fő típusait:
Bakteriális szennyeződés
Penész- és vírusfertőzés
Mycoplasma szennyeződés
Élesztő szennyeződés
1.1 Bakteriális szennyeződés
A baktériumok a mindenütt jelen lévő egysejtű mikroorganizmusok nagy csoportja.Általában csak néhány mikron átmérőjűek, és különféle formájúak lehetnek, a gömböktől a rudakig és spirálokig.Mindenütt jelenlétük, méretük és gyors növekedési ütemük miatt a baktériumok az élesztőgombákkal és a penészgombákkal együtt a leggyakoribb biológiai szennyeződések a sejttenyészetben.
1.1.1 Bakteriális szennyeződés kimutatása
A bakteriális szennyeződés könnyen kimutatható a tenyészet szemrevételezéses vizsgálatával a fertőzést követő néhány napon belül;
A fertőzött kultúrák általában zavarosnak (azaz zavarosnak) tűnnek, néha vékony filmréteggel a felületükön.
A táptalaj pH-értékének hirtelen csökkenésével is gyakran találkozhatunk.
Kis teljesítményű mikroszkóp alatt a baktériumok apró, mozgó szemcsékként jelennek meg a sejtek között, a nagy teljesítményű mikroszkóp alatti megfigyelés pedig fel tudja oldani az egyes baktériumok alakját.
1.2 Penész- és vírusfertőzés
1.2.1 Penészszennyeződés
A penészgombák a gombavilág eukarióta mikroorganizmusai, amelyek hifáknak nevezett többsejtű szálak formájában nőnek.E többsejtű filamentumok összekötő hálózatai genetikailag azonos magokat tartalmaznak, amelyeket kolóniáknak vagy micéliumoknak neveznek.
Az élesztőfertőzéshez hasonlóan a tenyészet pH-ja stabil marad a fertőzés kezdeti fázisában, majd gyorsan növekszik, ahogy a tenyészet súlyosabban fertőződik és zavarossá válik.Mikroszkóp alatt a micélium általában fonalas, néha sűrű spóracsoportok formájában.Számos penészgomba spórái túlélnek rendkívül zord és barátságtalan környezetben a nyugalmi fázisukban, és csak akkor aktiválódnak, ha a megfelelő növekedési feltételek fennállnak.
1.2.2 Vírusfertőzés
A vírusok mikroszkopikus méretű fertőző ágensek, amelyek átveszik a gazdasejt szaporodási gépezetét.Rendkívül kis méretük megnehezíti a tenyészetben történő kimutathatóságukat és a sejttenyésztő laboratóriumokban használt reagensekből való eltávolításukat.Mivel a legtöbb vírus nagyon szigorú követelményeket támaszt gazdáival szemben, általában nem befolyásolják hátrányosan a gazdaszervezeten kívüli fajok sejttenyészeteit.
A vírussal fertőzött sejttenyészetek használata azonban komoly kockázatot jelenthet a laboratóriumi személyzet egészségére nézve, különösen, ha emberi vagy főemlős sejteket tenyésztenek a laboratóriumban.
A sejttenyészetekben a vírusfertőzés elektronmikroszkóppal, antitest-készlettel végzett immunfestéssel, ELISA-val vagy megfelelő vírusprimerekkel végzett PCR-rel kimutatható.
1.3 Mikoplazmás fertőzés
A mikoplazmák egyszerű, sejtfal nélküli baktériumok, és úgy gondolják, hogy a legkisebb önszaporodó organizmusok.Rendkívül kis méretük (általában 1 mikronnál kisebb) miatt a mikoplazmát nehéz kimutatni, amíg el nem érik a rendkívül nagy sűrűséget, és a sejttenyészetek romlását okozzák;Addig általában nincs nyilvánvaló fertőzés jele.
1.3.1 A mikoplazmás szennyeződés kimutatása
Egyes lassan növekvő mikoplazmák megmaradhatnak a tenyészetekben anélkül, hogy sejthalált okoznának, de megváltoztatják a gazdasejtek viselkedését és anyagcseréjét a tenyészetekben.
A krónikus mycoplasma fertőzést csökkent sejtproliferációs ráta, csökkent telítési sűrűség és agglutináció jellemezheti szuszpenziós tenyészetben.
A mikoplazma-szennyeződés kimutatásának egyetlen megbízható módja azonban a tenyészet rendszeres tesztelése fluoreszcens festéssel (pl. Hoechst 33258), ELISA-val, PCR-rel, immunfestéssel, autoradiográfiával vagy mikrobiális vizsgálattal.
1.4 Élesztő szennyeződés
Az élesztőgombák a gombavilág egysejtű eukariótái, amelyek mérete néhány mikrontól (általában) 40 mikronig (ritkán) terjed.
1.4.1 Élesztőszennyeződés kimutatása
A bakteriális szennyeződéshez hasonlóan az élesztővel szennyezett kultúrák zavarossá válhatnak, különösen akkor, ha a szennyeződés előrehaladott stádiumban van.Az élesztővel szennyezett tenyészetek pH-ja nagyon keveset változik, amíg a szennyeződés súlyosabbá nem válik, ekkor a pH rendszerint megemelkedik.Mikroszkóp alatt az élesztő egyedi tojásdad vagy gömb alakú részecskékként jelenik meg, és kisebb részecskéket is termelhet.
2. Keresztfertőzés
Bár nem olyan gyakori, mint a mikrobiális fertőzés, számos sejtvonal HeLa-val és más gyorsan növekvő sejtvonalakkal való kiterjedt keresztszennyeződése egyértelműen meghatározott probléma, súlyos következményekkel.Szerezzen be sejtvonalakat jó hírű sejtbankokból, rendszeresen ellenőrizze a sejtvonalak jellemzőit, és alkalmazzon jó aszeptikus technikákat.Ezek a gyakorlatok segítenek elkerülni a keresztszennyeződést.A DNS-ujjlenyomat, a kariotipizálás és az izotipizálás megerősítheti, hogy van-e keresztszennyeződés a sejttenyészetben.
Bár nem olyan gyakori, mint a mikrobiális fertőzés, számos sejtvonal HeLa-val és más gyorsan növekvő sejtvonalakkal való kiterjedt keresztszennyeződése egyértelműen meghatározott probléma, súlyos következményekkel.Szerezzen be sejtvonalakat jó hírű sejtbankokból, rendszeresen ellenőrizze a sejtvonalak jellemzőit, és alkalmazzon jó aszeptikus technikákat.Ezek a gyakorlatok segítenek elkerülni a keresztszennyeződést.A DNS-ujjlenyomat, a kariotipizálás és az izotipizálás megerősítheti, hogy van-e keresztszennyeződés a sejttenyészetben.
Feladás időpontja: 2023.02.01