1.Mi az a sejttenyésztés?
A sejttenyésztés a sejtek állatokból vagy növényekből való eltávolítását, majd kedvező mesterséges környezetben történő termesztését jelenti.A sejteket közvetlenül a szövetből vehetjük, és enzimatikus vagy mechanikai úton lebonthatjuk a tenyésztés előtt, vagy származhatnak bevált sejtvonalakból vagy sejtvonalakból.
2.Mi az elsődleges kultúra?
Az elsődleges tenyésztés azt a tenyésztési szakaszt jelenti, amely után a sejteket elválasztják a szövettől, és megfelelő körülmények között addig szaporodnak, amíg el nem foglalják az összes rendelkezésre álló szubsztrátot (vagyis el nem érik az összefolyást).Ebben a szakaszban a sejteket tovább kell tenyészteni úgy, hogy egy új, friss tápközeget tartalmazó edénybe helyezik át őket, hogy több hely álljon rendelkezésre a folyamatos növekedéshez.
2.1 Sejtvonal
Az első szubkultúra után az elsődleges tenyészetet sejtvonalnak vagy szubklónnak nevezik.A primer tenyészetekből származó sejtvonalak élettartama korlátozott (azaz korlátozottak; lásd alább), és ahogy áthaladnak, a legnagyobb növekedési kapacitással rendelkező sejtek dominálnak, ami a populációban egy bizonyos fokú genotípust eredményez, amely megegyezik a fenotípussal.
2.2 Sejttörzs
Ha egy sejtvonal egy alpopulációját klónozással vagy más módszerrel pozitívan szelektálják a tenyészetből, a sejtvonal sejttörzzé válik.A sejttörzsek általában további genetikai változásokra tesznek szert a szülői vonal beindulása után.
3. Korlátozott és folyamatos sejtvonalak
A normál sejtek általában csak korlátozott számú alkalommal osztódnak, mielőtt elveszítenék szaporodási képességüket.Ez egy genetikailag meghatározott esemény, az úgynevezett öregedés;ezeket a sejtvonalakat véges sejtvonalaknak nevezzük.Egyes sejtvonalak azonban halhatatlanná válnak a transzformációnak nevezett folyamat révén, amely spontán, vagy vegyi anyagok vagy vírusok által indukálható.Amikor egy véges sejtvonal átalakul, és képessé válik a korlátlan osztódásra, folytonos sejtvonallá válik.
4. Kulturális állapot
Az egyes sejttípusok tenyésztési körülményei nagyon eltérőek, de a sejtek tenyésztésének mesterséges környezetét mindig egy megfelelő tartály alkotja, amely a következőket tartalmazza:
4.1 Esszenciális tápanyagokat (aminosavakat, szénhidrátokat, vitaminokat, ásványi anyagokat) biztosító szubsztrát vagy táptalaj
4.2 Növekedési tényezők
4.3 Hormonok
4.4 Gázok (O2, CO2)
4.5 Szabályozott fizikai és kémiai környezet (pH, ozmotikus nyomás, hőmérséklet)
A legtöbb sejt lehorgonyzásfüggő, és szilárd vagy félszilárd szubsztrátumon kell tenyészteni (tapadó vagy egyrétegű tenyészet), míg más sejtek a tápközegben lebegve növekedhetnek (szuszpenziós tenyészet).
5. Krioprezerváció
Ha a szubkultúrában túl sok sejt található, megfelelő védőanyaggal (például DMSO-val vagy glicerinnel) kell kezelni, és -130 °C alatti hőmérsékleten kell tárolni (mélyhűtés), amíg szükség van rájuk.További információ a sejtek szubkultúrájáról és mélyhűtéséről.
6. A sejtek morfológiája tenyészetben
A tenyészetben lévő sejtek alakjuk és megjelenésük (azaz morfológiájuk) alapján három alapvető kategóriába sorolhatók.
6.1 A fibroblasztsejtek bipolárisak vagy multipolárisak, hosszúkás alakúak, és a szubsztráthoz tapadva nőnek.
6.2 A hámszerű sejtek sokszögűek, szabályosabb méretűek, és külön lapok formájában kapcsolódnak a mátrixhoz.
6.3 A limfoblasztszerű sejtek gömb alakúak, és általában szuszpenzióban nőnek anélkül, hogy a felülethez kötődnének.
7.Sejtkultúra alkalmazása
A sejtkultúra a sejt- és molekuláris biológia egyik fő eszköze.Kiváló modellrendszert biztosít a sejtek normál fiziológiájának és biokémiájának (például anyagcsere-kutatás, öregedés), a gyógyszerek és toxikus vegyületek sejtekre gyakorolt hatásának, valamint a mutagenezis és karcinogén hatások tanulmányozásához.Ezenkívül gyógyszerszűrésre és -fejlesztésre, valamint biológiai vegyületek (például vakcinák, terápiás fehérjék) nagyüzemi gyártására is használják.A sejttenyészet alkalmazásának fő előnye ezen alkalmazások bármelyikében a klónozott sejtek kötegével elérhető eredmények konzisztenciája és reprodukálhatósága.
Feladás időpontja: 2019.06.03